Stručný prehľad súpravy na stanovenie alkalickej fosfatázy (Alp)

Dôležitou súčasťou každého dobrého laboratória sú rôzne typy nástrojov a produktov na prípravu vzoriek. Najbežnejšími typmi nástrojov na prípravu vzoriek sú bujónové mixéry, silikagélová elektroforéza/röntgenová difúzia, sklenené misky a mikrodoštičky na kyslé kultúry, jamky a kultivačné bubny. Všetky tieto produkty umožňujú analýzu a hodnotenie vzoriek takmer všetkých typov. Tieto typy produktov sú však navrhnuté na špecifické použitie, čo sťažuje zovšeobecnenie užitočnosti rôznych produktov na rôzne účely. Tu sa hodí spoľahlivá alkalická fosfatáza v ľudskom sére in vitro kit.

Spoľahlivá súprava alkalickej fosfatázy v ľudskom sére in vitro sa môže použiť na stanovenie retencie kyslého popola, kolorimetrie a liberálnosti vzorky. Hneď ako sa vzorky zmiešajú s kultivačným médiom, podstúpia niekoľko rôznych procesov. Najprv sa kultivačné médium zmieša so vzorkovým pufrom. Táto kombinácia umožňuje vzorkám zažiť viacero premenných, ktorých kľúčovou súčasťou je buffer. To umožňuje vedcom vyhodnotiť koncentrácie rôznych prvkov vo vzorkách v rôznych časoch.

Dôležitou súčasťou pufra je indikátor pH. Toto deteguje kyslosť vzorky na určenie koncentrácie substrátu. Ďalším krokom je opláchnutie vzoriek, aby sa odstránili akékoľvek povrchové zvyšky, ako je proteín alebo DNA. Potom sa vzorky inkubujú s rôznymi množstvami alfahydroxyacetónu a potom sa umiestnia do alkalického kultivačného média rozpusteného vo fosfátoch, ktoré obsahuje množstvo rôznych biologických sond, ku ktorým bola pridaná alkalická fosfatáza.

Súprava obsahuje oplachovaciu kefu a mikropohonnú pumpu. Súprava používa mikrokryštalické kvasinky ako rastové médium. Vzorky možno pestovať v Petriho miske naplnenej vodou alebo na magnetických platniach, kde sa vzorka prepláchne destilovanou vodou. Zmrazené ľudské sérum alebo zmrazené zvieracie sérum možno tiež použiť na nahradenie kultivačného média v súprave enzýmov rozpustených v alkalickom fosfáte na meranie aktivity alp in vitro.

Použitie tohto typu súpravy má niekoľko výhod. Po prvé, táto metóda je citlivá na zmeny koncentrácie substrátu, takže dokáže detekovať akékoľvek zmeny hladín substrátu, pokiaľ vzorka zostáva v suspenzii. To umožňuje výskumníkom vykonávať merania kinetiky alp, oxidácie substrátu a iných biochemických procesov. V prípade potreby možno nahradiť aj vzorky séra a kultivačné médium použité v enzýmovom teste.

Laboratórne činidlá v súprave zahŕňajú činidlá so štandardnou krivkou a indikátory pH. K dispozícii je tiež prispôsobená štartovacia súprava. Prispôsobená štartovacia súprava obsahuje vzorky ľudskej plazmy od štyroch rôznych jednotlivcov. Krvný tlak, pulz a teplota sa merajú ako súčasť analýzy štandardnej krivky pre každú osobu.

Indikátor pH v súprave je digitálna sonda, ktorú možno použiť na stanovenie kyslosti alebo zásaditosti ľudského séra alebo zmrazených vzoriek. Indikátor pH a suspenzia mikrokryštalických kvasiniek sa spoja s testovacími činidlami. Po zmiešaní troch zložiek sa vzorky inkubujú dve hodiny pri 37 °C. Vzorky sa potom nechajú analyzovať lineárnym rozsahom koncentrácií činidiel štandardnej krivky, aby sa určila hustota vzorky a koncentrácia alkalického fosfátového amínu. Mikrokryštalické kvasinky sa potom podrobia lineárnemu rozsahu koncentrácií substrátového amínu v testoch koncentrácie alkalického fosfátového amínu, aby sa určila koncentrácia substrátu a hustota alkalického fosfátového amínu vo vzorkách.

Súprava obsahuje návod na použitie s úplnými pokynmi na používanie súpravy a postupom na výpočet činidiel potrebných na použitie v testoch. Súpravu možno použiť buď na jeden, alebo na viacero testov. Použité činidlá sú na báze latexu a nebudú nepriaznivo reagovať so žiadnym liekom, ktorý sa užíva perorálne. Vo vzorkách je možné zistiť 10-250 u alp. Viac informácií o testovacích postupoch a postupoch odberu vzoriek nájdete na webových stránkach výrobcov na vyžiadanie.