Vysoko kvalitná súprava na stanovenie adenozíndeaminázy

Adenozíndeamináza (ADA) je prirodzený enzým, ktorý sa podieľa na imunitnej odpovedi. Funkciou adenozíndifosfátu (ADP) je aktivovať bunky a vykonávať membránovú permeabilizáciu a cytotoxický účinok. Adenozín bol identifikovaný ako jedna z najdôležitejších aminokyselín potrebných pre normálnu činnosť ľudského mozgu. Je syntetizovaný v pečeni a je distribuovaný v krvnej plazme pôsobením imunitného systému. Adenozíndifosfát je nosičom antivírusového genetického materiálu. V Biomedical Expo sa ADA Activity Assay Kit použije v kombinácii s predtým spomínaným BioVision Cytokine.

Adenozíndifosfát (ADP) je nosičom rastového faktora T-lymfocytov. V BioVision Cytokine sa adenozíndeamináza (ADO) extrahuje z vyrezanej obličky a analyzuje sa pomocou komerčne dostupného spektrofotometrického automatizovaného testu. Činidlo bolo vopred ošetrené anti-fosfo-dglukózou (PI), aby sa zabránilo jeho reakcii s analytom.

Zloženie komerčne dostupnej súpravy AIDA Activity Assay Kit obsahuje dve hlavné zložky – činidlo a laboratórne vybavenie. Činidlá obsiahnuté v súprave Aida Activity Assay Kit zahŕňajú purifikovaný enzýmový koktail (Sigma-FCA). Laboratórne vybavenie pozostáva zo skenera mikrodoštičiek (namontovaného za podložným sklíčkom), skleneného riadu, knihy výsledkov štandardných kriviek a oplachovacej fľaše. Pred použitím sa musia vzorky súpravy Aida Activity Assay Kit umyť dechlórovanou vodou. Použitie činidla a laboratórneho vybavenia nie je obmedzené len na laboratórne testy.

Na preskúmanie schopnosti súpravy Aida Activity Assay Kit merať celkovú aktivitu adenozíndeaminázy sa uskutočnilo niekoľko experimentálnych sedení. Prvé sedenie pozostávalo zo štyroch dní manuálneho sledovania. Stopäťdesiat mikrolitrov Aida-GFP sa rozpustilo vo vode z vodovodu a zmiešalo sa s fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom. Po dvadsiatich minútach sa vzorky testovali na obrazovke hmotnostnej bilancie HPLC.

Druhá relácia zahŕňala ďalšie dva dni manuálneho sledovania. Vzorky sa vstrekli do krivkovej kazety počas dvoch hodín, ako je opísané vyššie. Tretie sedenie zahŕňalo ďalšie tri dni manuálneho sledovania v tej istej miestnosti, po ktorých nasledovali štyri hodiny subkutánnych injekcií adenozíndeaminázy (ADCA). Vzorka krvi sa odobrala po jednej hodine na analýzu.

Na testovanie slín sa päťsto mikrolitrov štandardných roztokov deaminázy a pH zvýšilo v nesterilnom razidle. Ošípané mohli podľa potreby piť celý rad tekutín, od čistej vody až po diétnu sódu. Keď štandardné roztoky dosiahli svoj bod varu, vložilo sa kvapkadlo s vopred určeným objemom slín a merala sa aktivita adenozíndeaminázy.

Posledná skupina šiestich vzoriek sa analyzovala s použitím komerčne dostupnej súpravy na test fosforimidazoleamínu na báze slín (Saproflavil; Thermo Instruments). V tejto sade testov sa jedna kvapka činidla fosforimidazolamín/slinné ada zmiešala s objemom vodovodnej vody a do vzoriek sa pridal vysušený prášok. Po tridsiatich minútach sa odobrala druhá vzorka tej istej vzorky. V tomto prípade bola aktivita v slinách meraná okamžite. Súprava bola špeciálne navrhnutá na meranie aktivity kyseliny v ľudských slinách. Ako sa dalo očakávať, bolo možné zistiť značné množstvo aktivity.

Ako sa očakávalo, oba analyzátory poskytli podobné výsledky. Vysoko špecifická povaha analýzy slinno-pozitrónovej emisnej tomografie (SPECT) spolu s vysoko citlivou metodológiou (vysoká detekcia intraorálnych tekutín) viedli k konzistentne vysokej presnosti a významným meraniam. Laboratórny personál použitý na postupy boli všetci odborníci v danej oblasti. Neexistoval žiadny dôkaz kontaminácie alebo akejkoľvek chyby experimentu. Testované osoby poskytli informovaný súhlas a postup sa riadil odporúčaniami Americkej asociácie klinických endokrinológov. Celkovo výsledky získané z Adenosine Deaminase Assay Kit preukázali dobrú reprodukovateľnosť, čo bolo potvrdené samostatnými štúdiami z nezávislých klinických laboratórií.