Súprava na stanovenie leucínovej aminopeptidázy

Leucín aminopeptidáza (LAMA) je zmes peptidov a je považovaná za jeden z najsilnejších dostupných prírodných kompetitívnych modulátorov. Je schopný blokovať pôsobenie niekoľkých aminooxidáz, čím účinne znižuje úroveň aktivity enzýmu (enzýmov). Leucín je dobre známa aminokyselina, ktorá hrá dôležitú úlohu pri syntéze bielkovín. Leucín pôsobí ako inhibítor cystínaminooxidázy (CAAO), čím bráni rozkladu nukleotidov v DNA, ako doplnková aktivita k deaminácii niekoľkých chemikálií. Zistilo sa tiež, že leucín je silným aktivátorom peroxylázy a je jedným z prekurzorov glykozylovaných proteínov. Zistilo sa tiež, že leucín má anti-aminokyselinové účinky a používa sa ako doplnok stravy.

Leucín aminopeptidáza (LAMA) je dôležitou zlúčeninou pre mnohé výskumné štúdie v neurochémii. Zistilo sa, že inhibítory LAMA sú účinné pri neurodegeneratívnych poruchách, ako je mŕtvica, Huntingtonova choroba, porucha pozornosti (ADD) a demencia, pretože sú účinné pri inhibícii aktivity glykozylovaných dráh. Leucín chráni synapsie pred nadmernou stimuláciou, zabraňuje degenerácii dendritov v mozgu, zabraňuje tvorbe neurotubulov a zabraňuje hromadeniu acetylcholínu v neurónoch. Predpokladá sa, že leucín zlepšuje neurotransmisiu, synaptickú plasticitu. Molekula leucínu pôsobí aj ako substrát inzulínového receptora a bola študovaná pri cukrovke a obezite. Leucín sa tiež používa pri liečbe Parkinsonovej choroby a predpokladá sa, že táto aminokyselina môže byť schopná zvrátiť niektoré kognitívne nedostatky spojené s touto chorobou.

Leucín môže byť hydrolyzovaný pankreatickým enzýmom inzulínom, čo vedie k produkcii inzulínu. Molekuly leucínu sa potom viažu spolu s glukózou. Molekula glukózy sa potom pripojí k leucínovému receptoru na povrchu nervovej bunky a spustí proces nazývaný „fosforylácia“. Fosforylácia je komplexná reakcia, ktorá zahŕňa väzbu molekúl glukózy na leucínový receptor. To umožňuje transport väčšieho množstva glukózy do buniek a následne zásobuje bunky energiou. Leucín je hlavný chemický neurotransmiter v centrálnom nervovom systéme a podieľa sa na procesoch, ako je učenie a pamäť, pohyb očí, svalová koordinácia, svalová sila, imunita, regulácia krvného tlaku a starnutie pokožky.

Existuje mnoho rôznych prostriedkov na analýzu peptidov a iných proteínových molekúl s aminokyselinovými zvyškami. Jedna metóda zahŕňa použitie fluorescenčných sond, ktoré sú citlivé na prítomnosť leucínaminopeptidázy. Prítomnosť tejto zlúčeniny vo vzorke proteínu po vizuálnej kontrole bude indikovať stupeň hydrolýzy. Rôzne koncentrácie leucínaminopeptidázy budú mať rôzne dôsledky. Napríklad vysoké hladiny tejto látky spôsobia oveľa výraznejší vizuálny efekt ako nízke hladiny.

Hlavnou úlohou leucín aminopeptidázy je rozložiť dvojitú väzbu medzi dvoma aminokyselinami, kyselinou l-glutámovou a l-lyzínom. Tieto dva proteíny sú nevyhnutné pre fungovanie svalových buniek. Kyselina l-glutámová je dôležitá pri tvorbe kolagénu, zatiaľ čo l-lyzín je nevyhnutný pre syntézu proteínov, ako je nukleová kyselina. Keď je hladina týchto dvoch aminokyselín abnormálne nízka, môže to viesť k závažným a niekedy život ohrozujúcim stavom.

Primárnou blotovou zlúčeninou použitou na túto analýzu je N-fenyl-taurínový derivát leucínaminopeptidázy. Tento konkrétny derivát sa viaže na membránu črevných epiteliálnych buniek a uvoľňuje AMP z väzbového miesta. Leucín AMP sa potom deteguje absorpčnou kapacitou membrány pri špecifickom pH. Tento konkrétny typ testu je ideálny na stanovenie účinnosti terapeutických zásahov a rozhodovanie o úrovniach dávkovania.

Existuje množstvo rôznych metód na meranie katalytickej aktivity enzýmu. Jedna z týchto metód zahŕňa použitie substrátu, ktorý je komplementárny k enzýmu. Prítomnosť komplementárneho substrátu zmení rýchlosť, ktorej je enzým schopný katalyzovať reakciu. Tento typ metódy sa typicky uskutočňuje na neesenciálnych blotových molekulách, pretože prítomnosť molekuly, ktorá vyžaduje špecifický zdroj energie, zníži celkovú účinnosť molekuly. Ďalší spôsob merania aktivity aminopeptidázy využíva mikroorganizmy rastúce v skúmavkách. Tieto bunky rastú a delia sa, aby vytvorili kultúru, a potom je možné merať rýchlosť, ktorej sa rozmnožujú.

Leucínové peptidy v aminopeptidázach poskytujú energetický mechanizmus, ktorým sú enzýmy schopné katalyzovať reakciu. Aminokyseliny sú držané pohromade peptidovou väzbou. Je to preto, že aminokyseliny môžu byť odvodené buď priamo z proteínu, alebo môžu byť odvodené z iných chemických zlúčenín, ktoré vyžadujú zdroj energie na spustenie ich tvorby. Peptidová väzba umožňuje jednej alebo viacerým aminokyselinám pôsobiť ako jeden kus molekuly, čo vedie k oveľa vyššej rýchlosti pohybu molekúl, než by bolo možné, keby boli chemické zložky oddelené. Leucínaminopeptidázy sa teda používajú na poskytovanie širokého spektra diagnostických a terapeutických testov.

Originálne produkty na https://www.zjkangte.com/product/liver-function/lap-leucine-aminopeptidase-assay-kit-continuous-monitoring-method.html