NEFA Assay Kit je nástroj na kvantifikáciu NEFA

Testovacia súprava NEFA je nástroj na kvantifikáciu NEFA (Nitric Oxide). Používa sa na stanovenie koncentrácie NEFA vo vzorkách krvi alebo tkaniva. NEFA je životne dôležitá živina, ktorá je zodpovedná za reguláciu energetického metabolizmu, srdcovej dráždivosti, nervovosvalového vedenia, krvného tlaku a zrážania krvi. Nachádza sa najmä v kostiach, svaloch, mäkkých tkanivách a červených krvinkách.

Príprava

NEFA je malý, 50,2 kDa proteín, ktorý má schopnosť viazať sa na DNA. Ide o cytosolický komplex syntázy mastných kyselín typu I (FAS), ktorý produkuje neesterifikovanú kyselinu palmitovú. V prítomnosti Acyl-CoA oxidázy (ACS) komplex FAS oxiduje 3-metyl-N-etyl-N-(b-hydroxyetyl)-anilín na 4-aminoantipyrín, ktorý je molekulárnym prekurzorom acetyl-CoA. Tento proces je rozhodujúci enzymatický proces pre všetky eukaryotické organizmy.

Hoci NEFA nemusí mať takú veľkú hmotnosť ako tuk, je dôležitým zdrojom paliva pre periférne tkanivá. Metabolizuje sa v pečeni a transportuje sa v komplexe s albumínom do periférnych tkanív. NEFA je tiež uvoľňovaná tioesterázovou (TE) doménou komplexu FAS.

Pipetovanie

Súpravy ELISA sa používajú na detekciu malých chemických zlúčenín, proteínov a peptidov. Tieto súpravy sú založené na rekombinantných proteínoch exprimovaných v E. coli. Súpravy neobsahujú azid, thimerosal a iné prírodné zdroje.

V súprave sú reagencie ako BSA, apyrogénny riediaci pufor a premývací roztok. Premývací roztok je stabilný dva týždne pri 2-8°C. Riediaci pufor obsahuje 0,9 % fyziologického roztoku.

Súprava má vnútorný štandard NEFA. K tomu sa pridá NEFA v koncentrácii, ktorá zodpovedá očakávanej koncentrácii vo vzorke. Meria sa absorbancia modrofialového pigmentu pri 546 nm, aby sa vypočítala koncentrácia NEFA vo vzorke.

Kolorimetrické

Používanie súpravy WAKO NEFA vyvolalo rôzne výsledky, vrátane niektorých, ktoré sú nezmyselné. Napriek tomu je súprava NEFA dôstojným uchádzačom, pokiaľ ide o stanovenie relatívneho obsahu mastných kyselín vo vzorkách živočíšneho tkaniva. Súprava NEFA ako taká je jedným z najpopulárnejších laboratórnych testov. Súprava sa dodáva s pokynmi na testovanie rôznych typov vzoriek vrátane krvi, séra, slín a rôznych lipidov.

Najzaujímavejšou časťou súpravy je, že ju možno použiť na meranie rôznych mastných kyselín vrátane tých, ktoré sa bežne nachádzajú v lipidoch. Súprava sa dodáva s radom enzýmov navrhnutých na detekciu rôznych mastných kyselín, vrátane mastných kyselín C-8 a C-16, ktoré sa nachádzajú u ľudí a zvierat. Napriek tomu sa súprava neodporúča používať pri vysoko presných koncentráciách FFA v širokom rozsahu.

Elektrochemické

NEFA sú dôležité mastné kyseliny pre ľudské zdravie, ale zriedka sa hodnotia. Ich detekcia je navyše veľmi drahá. Preto sledovanie zmien ich koncentrácií môže pomôcť pri presnejšej prevencii a liečbe chorôb. V tejto štúdii bola vyvinutá elektrochemická testovacia súprava pre NEFA s použitím PDA-MWCNT ako povrchu senzora. Táto elektróda vykazovala dobrú elektrokatalytickú aktivitu pre oxidačné kroky NEFA a mohla byť použitá v aplikáciách v reálnom živote.

Enzýmová elektróda pozostávala z viacvrstvového kompozitného filmu PDA-MWCNT a ACOD, ACS a polyméru. Poradie vrstiev bolo zvolené tak, aby zodpovedalo poradiu enzymatickej reakcie. Zistilo sa, že ACS a ACOD zostali vo filme biologicky aktívne.

Koncentrácia NEFA v T2D

Koncentrácie NEFA v krvi boli študované v kontexte obezity a hypertenzie. Ukázalo sa, že tieto zlúčeniny podporujú zvýšenie BP prostredníctvom a1-adrenergnej stimulácie a zvyšujú oxidačný stres. NEFA sú tiež spojené s metabolickým syndrómom. Tieto zlúčeniny môžu byť dôležité pri rozvoji hypertenzie.

Bolo navrhnutých niekoľko modelov na opis plazmatickej odozvy NEFA na intravenóznu stimuláciu glukózou. Bostonský model presne zobrazil štvrtú fázu zvýšenia koncentrácie NEFA. Model však neopisoval počiatočnú fázu latencie. Fabiánov model použil na opis tejto fázy jednoduchý exponenciálny sklon. Podobne Thomasethov model nebol schopný opísať fázu odrazu.

Hladiny NEFA v triglyceridoch

Niekoľko štúdií skúmalo účinky bariatrickej chirurgie na zloženie NEFA v plazme. V metaanalýze publikovanej v roku 2016 sa hladiny NEFA v sére znížili 6 a 12 mesiacov po operácii. Mohlo to byť spôsobené zníženou hladinou inzulínu. V inej štúdii boli plazmatické NEFA merané u skupiny obéznych pacientov pred a po operácii žalúdočného bypassu Roux-en-Y.

Koncentrácie siedmich NEFA boli znížené 9 mesiacov po operácii. Linoleát (omega-6 mastná kyselina) sa znížil o 18:2, stearát o 18:0 a oleát o 16:0. Koncentrácia dokosahexaenoátu však nebola ovplyvnená. NEFA boli prevedené na metylestery mastných kyselín (FAME). Tie sa potom analyzovali plynovou chromatografiou-hmotnostnou spektrometriou (GC-MS).